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Perguntas técnicas comuns sobre injeção na pesquisa e verificação de processos (2)

2021-02-08

21: Posso perguntar qual é o método de teste para o nível de contaminação e a resistência ao calor (valor D) do microrganismo antes da esterilização?

Resposta: o nível de contaminação microbiana geralmente é interceptado por filtração em membrana, sendo posteriormente transferido para a superfície de um meio sólido, onde é cultivado e contado. Deve-se prestar atenção ao volume da filtragem e ao número de microrganismos interceptados, garantindo assim uma taxa de detecção suficiente (rendimento de filtração adequado) e a possibilidade de contagem (evitando que um número excessivo de microrganismos interceptados torne impossível sua contagem).

 

22: Como calcular a quantidade de inoculação com base no valor D?

Resposta: Cálculo da quantidade de inoculação de esporos Ni = 10Do(lgNo + 6)/Di
Ni é o número de inoculação de esporos termotolerantes com indicador biológico; No é o limite de microrganismos contaminantes antes da esterilização; Do é o valor D máximo permitido dos microrganismos contaminantes; Di é o valor D do indicador biológico — esporos termotolerantes.
 
23: Para os produtos finalmente esterilizados pelo método da probabilidade residual, se o número de microrganismos de cada lote for limitado antes da esterilização e o tempo máximo permitido para a realização do teste for de 72 horas, enquanto o ciclo real contínuo de produção for significativamente inferior a 72 horas, será o resultado do teste apenas uma referência para o nível de garantia asséptica do produto esterilizado?
Resposta: É óbvio que o resultado do teste de teor de microorganismos antes da esterilização está muito aquém do processo produtivo e não se destina ao controle intermediário do lote atual de produtos.
A importância da inspeção: primeiro, avaliar o nível de garantia asséptica deste lote de produtos; segundo, após acumular dados sobre o teor microbiano de muitos lotes durante um longo período antes da esterilização, será possível realizar uma avaliação abrangente do estado de contaminação microbiana em cada etapa do sistema de produção antes da esterilização, indicando assim se o sistema de produção consegue controlar eficazmente a contaminação microbiana em um nível adequado e se é necessário implementar melhorias.
 
 
24: Posso perguntar qual é o método utilizado para estudar a espécie e a quantidade de microrganismos? Quais são os equipamentos necessários? Caso seja adotado o método da probabilidade residual, é necessário determinar o nível de microrganismos no processo produtivo, e quanto será o aumento nos custos se essa medida for implementada? Como fabricante de grandes volumes de infusões, seria necessário estabelecer um laboratório microbiológico especializado para detectar o nível de contaminação microbiana antes da esterilização pelo método da probabilidade residual?
Resposta: O grau de contaminação microbiana—ou seja, a quantidade—pode ser examinado de acordo com o método de teste de limite microbiano descrito na Farmacopeia; as espécies de microrganismos podem ser identificadas sucessivamente pelos seguintes aspectos:
1) Observe a morfologia da colônia a olho nu;
2) Morfologia microscópica e mobilidade
3) Teste bioquímico geral: coloração de Gram ou teste com KOH a 3%;
4) Identificação bioquímica (ou seja, teste API) para a identificação de espécies
Ao utilizar o método de probabilidade residual, deve-se detectar o nível de contaminação microbiana do produto antes da esterilização, incluindo o teste de ebulição com bactérias contaminantes (por exemplo, 100 °C, 15 minutos) e a contagem microbiana.
O laboratório microbiológico é essencial para os fabricantes de injeções, e suas funções básicas devem incluir o teste de limite microbiano de matérias-primas e auxiliares, o teste de contaminação microbiana antes da esterilização, o teste asséptico do produto, o teste de endotoxinas bacterianas e a inspeção dinâmica do ambiente de produção (contagem de partículas no ar, bactérias flutuantes e bactérias sedimentares). Laboratórios qualificados também podem realizar os seguintes trabalhos: identificação de microrganismos (recomenda-se que o laboratório central do grupo realize a identificação por API) e calibração de indicadores biológicos (isto é, determinação do valor D; sugere-se que o laboratório central do grupo empresarial realize esse trabalho).
 

25: É necessário verificar o processo de esterilização para o método de sobre-esterilização? Qual é a diferença entre o processo de pesquisa e desenvolvimento do produto e a verificação na produção real do método de probabilidade residual?

Resposta: é claro que a verificação é necessária. Artigo 83 do Apêndice CGMP da UE: todos os processos de esterilização devem ser verificados. O método da probabilidade residual é o próprio projeto do processo de esterilização, que precisa, por si só, ser verificado e confirmado.

 

26: O método de superdosagem garante que não haja necessidade de testes de desafio microbiano?

Resposta: A conotação do método de super-eliminação reside no fato de que o número de microrganismos no produto é reduzido em 12 logaritmos, e o teste de desafio microbiano visa comprovar que a probabilidade residual de microrganismos não excede 10⁻⁶. Portanto, o método de super-eliminação não pode ser utilizado para realizar testes de desafio microbiano.

 

27: O produto esterilizado final está sujeito a verificação separada do equipamento para cada variedade solicitada para registro? É possível realizar a verificação do equipamento apenas uma vez, permitindo que outras variedades sejam utilizadas de forma comum? Os dados da verificação do equipamento podem não ser anexados aos dados da verificação da variedade, servindo apenas como referência arquivística?

Resposta: O produto final de esterilização não precisa ser verificado separadamente para cada variedade solicitada ao registro. Caso a variedade registrada adote condições de esterilização iguais ou inferiores, somente poderá ser realizada a verificação do equipamento sob as condições de esterilização com temperatura mais elevada; os dados da verificação do equipamento para as condições de esterilização da variedade também devem ser anexados aos dados de verificação da própria variedade.

 

28: O processo de esterilização de formas farmacêuticas não solúveis, semi-sólidas ou injeções em pó pode calcular um valor semelhante ao F0? É possível determinar o SAL? Quais são as disposições específicas?

Resposta: Não é possível, mas é possível calcular o SAL. Consulte a árvore de decisão para a seleção do processo de esterilização da UE.

 

29: No que diz respeito ao teste de enchimento do meio de cultura, quer saber se ele é verificado tanto para a linha de produção quanto para os produtos declarados (cada produto deve ser preenchido em três lotes para verificação)?
(1) A verificação da linha de produção pode substituir o teste de enchimento do produto declarado (variedades semelhantes)?
(2) Que tipo de meio você deseja, tioglicolato e Martin modificado?
(3) Os três lotes de testes de enchimento são necessários para diferentes especificações de embalagem na inspeção da GMP?
 
Resposta: (1) O teste simulado de enchimento com meio de cultura deve ser realizado conforme os diferentes produtos, especificações de embalagem e formas de acondicionamento. Por exemplo, caso o produto seja uma injeção em pó, o teste simulado de enchimento com meio geralmente envolverá primeiro o preenchimento com meio líquido, seguido pelo enchimento do pó asséptico correspondente ao produto simulado (como o pó asséptico PEG); já para injeções assépticas ou injeções em pó liofilizadas, basta realizar o enchimento apenas com o meio líquido. Além disso, se as especificações de embalagem forem 2 ml, 5 ml ou 10 ml, mesmo que se trate do mesmo produto, será necessário realizar um teste simulado específico com seu próprio meio de cultura. Por outro lado, caso a embalagem adote a forma de frascos tipo vial ou outras configurações (como seringa pré-cheia ou ampola), os testes simulados de enchimento com meio de cultura deverão ser realizados separadamente, tendo em vista a utilização de linhas de produção distintas.
 
 
(1) No trabalho específico, considerando que o teste de enchimento com simulação de meio é, na verdade, uma verificação sistemática de toda a linha de produção, incluindo equipamentos de fabricação, ambiente e operação do pessoal, entre outros, se o teste for realizado nas piores condições — ou seja, utilizando o frasco de maior volume, com a menor velocidade de enchimento, o maior número de funcionários e um tempo superior ao habitualmente empregado na produção normal —, então será possível realizar o teste de enchimento com simulação de meio para cada produto e especificação sem necessidade adicional. Caso as condições não correspondam às piores, o teste deverá ser conduzido conforme as características específicas de cada produto.
 
(2) O meio de amplo espectro é geralmente utilizado para promover o crescimento de bactérias gram-positivas, gram-negativas, leveduras e bolores, como o meio de triptona de soja, enquanto o meio anaeróbico é empregado apenas em circunstâncias especiais.
 
(3) Apenas no momento da primeira verificação, cada especificação exige três testes consecutivos bem-sucedidos de enchimento com simulação de meio; posteriormente, são necessários dois testes adicionais por ano e um lote de testes de enchimento com simulação de meio a cada vez.
 
30: É viável observar o efeito asséptico do filtro durante o processo de desinfecção e instalação no teste de enchimento do meio, após a esterilização do meio, antes do enchimento, e então filtrando através da membrana do filtro?
A: O teste de enchimento com meio é uma investigação do grau de garantia asséptica de todas as etapas, incluindo a filtração asséptica. Recomenda-se que o meio seja preparado e utilizado diretamente nos processos de filtração asséptica e no subsequente processo de enchimento. Na prática, deve-se prestar atenção para evitar que partículas insolúveis obstruam o filtro.
 
31: Quantas séries de ensaios com enchimento médio são revalidadas duas vezes por ano, em cada ano?
A: Para a revalidação anual de um produto, a prática habitual é realizar testes de enchimento médio duas vezes ao ano, em cada lote.
 
32: O tempo de cultura estéril da edição de 2005 da Farmacopeia Chinesa foi alterado para 14 dias. É necessário também estender o teste de cultura a duas temperaturas após a simulação e enchimento do meio?
A: O tempo total de cultivo não deve ser inferior a 14 dias. Ele pode ser dividido em duas temperaturas (22,5 graus e 32,5 graus) por pelo menos 7 dias, ou realizado diretamente em uma única temperatura (22,5 graus).
 
 
33. Por favor, explique qual método estatístico é utilizado e como calcular a tabela.
Resposta: a explicação detalhada da fórmula de cálculo pode ser consultada no "Guia de Verificação da Produção de Medicamentos (2003)", organizado pelo Departamento de Supervisão de Segurança de Medicamentos e pelo Centro de Administração de Certificação de Medicamentos da Administração Estadual de Alimentos e Medicamentos, publicado pela Editora da Indústria Química, página 258.
Existem dois métodos de cálculo. Um deles é utilizar a fórmula aproximada da distribuição de Poisson, ou seja, P(X > 0) = 1 - e^(-Np) > 0,95, onde P representa o limite de confiança, N é o número de garrafas ou lotes simulados e 0,1% é a probabilidade de contaminação.
O outro método é uma fórmula binomial mais precisa, ou seja, P(X > 0) = 1 - (1 - X), onde P representa o limite de confiança, N é o número de frascos ou lotes, e 0,1% (probabilidade de contaminação).
Na página 259 do livro, há uma tabela que apresenta a relação entre a quantidade simulada de embalagem, a quantidade de poluição e a probabilidade de poluição em uma embalagem simulada, com limite de confiança de 95%.
 
 
34: No cinquagésimo nono filme, na página 72 da apostila, menciona-se que as diferenças nos procedimentos de enchimento do meio nas verificações dos processos de injeções em pó, injeções em pó liofilizadas e injeções de pequeno volume residem principalmente em quê, como, onde e desde onde até onde?
Resposta: para injeção asséptica de pó, a forma de enchimento do meio apresenta certas particularidades. Caso se deseje preparar um pó asséptico simulado, adicione o meio líquido ao frasco com uma seringa após a embalagem; ou então, divida separadamente o pó asséptico em meios e adicione água estéril para injeção com uma seringa após a conclusão. No entanto, o objetivo é investigar o grau de garantia asséptica de todo o processo de embalagem asséptica.
 
35: Como verificar a vedação dos contêineres?
A: Métodos físicos e microbiológicos são frequentemente utilizados para verificar a vedação dos recipientes. A detecção física apresenta diversas vantagens, como alta sensibilidade, facilidade de uso, detecção rápida e baixo custo. Durante o período de validade do produto, métodos físicos de teste podem ser empregados para determinar se a integridade da embalagem atende aos requisitos prescritos. Uma razão importante para realizar testes de integridade da embalagem é garantir que os produtos assépticos permaneçam estéreis.
Portanto, na fase de pesquisa e desenvolvimento da embalagem do produto, devemos considerar a utilização do ensaio de invasão microbiana ou do método físico de teste, que já foi comprovado e demonstrou ser mais eficaz do que a detecção microbiana para avaliar a integridade da embalagem do produto. No entanto, no caso dos testes de estabilidade do produto durante o período de validade, é difícil realizar o ensaio de invasão microbiana; portanto, sugere-se adotar o método físico de detecção. O ensaio de invasão microbiana representa um desafio significativo para a avaliação da integridade do sistema final de esterilização do recipiente e vedação. Durante o teste de verificação, deve-se utilizar frascos para infusões ou frascos de cefalosporina (vials), preenchê-los com meio de cultura adequado e esterilizar os tampões e as tampas na linha de produção normal. Em seguida, a superfície de vedação do recipiente é imersa em uma solução bacteriana altamente concentrada em movimento, permitindo que a invasão microbiana seja detectada, cultivada e analisada para confirmar a integridade do sistema de vedação do recipiente. Ao mesmo tempo, é necessário realizar um teste de controle positivo para garantir a capacidade de crescimento do meio de cultura utilizado.
 
36: Na utilização da imersão microbiana para a verificação do selamento de recipientes, por que remover antecipadamente a tampa de alumínio? Após a remoção da tampa de alumínio, resta apenas o tampão de borracha; portanto, durante o teste, haverá vazamento de líquido que poderá afetar os resultados da verificação?
A: A remoção da tampa de alumínio visa criar condições mais rigorosas. Na palestra, a injeção de pó liofilizado é utilizada como exemplo. Geralmente, há alto vácuo no recipiente, o que impede vazamentos. O técnico pode avaliar se a remoção da tampa de alumínio é adequada com base nas características do seu produto.
 
37: Na validação da estanqueidade, como a realizada em tambores de alumínio, os resultados não podem ser observados por meio de verificação com o meio. Existe algum outro método?
A: para recipientes de matérias-primas assépticas, recomenda-se experimentar métodos físicos, como a infiltração por salmoura.
 
38: Qual é a quantidade geral de amostragem por validação de vazamento e qual é o período de revalidação?
Resposta: pode retirar pelo menos 10 frascos do início, meio e fim da linha de vedação para realizar o teste. A verificação inicial deve avaliar a propriedade de vedação em diferentes momentos dentro do período de validade, sendo possível realizar essa verificação uma vez por ano.
 
39: Existem requisitos nas diretrizes de validação para a verificação da selabilidade de produtos para infusão em grande volume, mas não há quaisquer exigências para produtos embalados individualmente e para produtos liofilizados. Será que não é necessária a verificação da selabilidade?
A: A verificação da vedação do recipiente deve ser realizada para injeções de grande volume, injeções de pequeno volume e injeções de pó.
 
40: Os testes de estanqueidade dos recipientes são obrigatórios em todas as formulações injetáveis, como ampolas e frascos de solução salina?
A: O teste de vedação dos recipientes deve ser realizado em todas as formas farmacêuticas injetáveis, como ampolas e frascos para solução salina. No entanto, os métodos utilizados são distintos. O método físico é geralmente empregado em ampolas, enquanto os métodos físicos e microbiológicos são aplicados em frascos para injeção.